不锈钢固体发酵罐是一种广泛应用于生物工程、食品工业及制药领域的关键设备,主要用于好氧性微生物在固态基质上的培养与发酵过程。其核心优势在于采用优质304或316L不锈钢材质制造,具有优异的耐腐蚀性、易清洁性和长使用寿命,完q符合GMP(药品生产质量管理规范)及食品卫生标准。
不锈钢固体发酵罐普遍配备PLC或DCS智能控制系统,可实时监测并自动调节温度、pH值、湿度、转速及进气量等关键参数,大幅降低人工干预成本,提高发酵过程的稳定性和重复性。其设计注重卫生死角消除,内壁经抛光处理,支持CIP(原位清洗)和SIP(原位灭菌),确保无菌操作环境。
不锈钢固体发酵罐的操作方法详解:
一、操作前准备
1、设备检查:
检查罐体、搅拌桨、传感器接口等部位是否有裂缝、变形或泄漏风险。
确保焊接部位密封性良好,避免灭菌过程中出现泄漏。
检查进料口、出料口、通气口、温度传感器接口、pH值传感器接口等连接牢固,无松动或破损。
确保所有阀门(如进料阀、出料阀、排气阀)开闭状态正常,密封性能良好。
2、配套设备检查:
检查电源、空压机、微机系统和循环水系统是否正常工作。
确保水压、电压、气压正常供应,进水压维持在0.12MPa,允许在0.15~0.2MPa范围变动,不能超过0.3MPa,温度应低于发酵温度10℃。
单相电源AC220V±10%,频率50Hz,罐体可靠接地。
输入蒸汽压力应维持在0.4MPa,进入系统后减压为0.24MPa。
空压机压力值0.8MPa,空气进入压力应控制在0.25~0.30MPa。
3、原料准备:
根据需要将培养基配入罐体,确保培养基成分符合要求,并经过严格的灭菌处理。
准确地称量和混合原料,确保营养成分的均匀分布。
注意添加的水分要适量,以避免发酵液过于稀薄或浓稠,影响发酵效果。
4、传感器校准:
使用标准温度计对温度传感器进行校准,确保测量误差在允许范围内。
使用标准的pH缓冲液对pH电极进行校准,一般有两种缓冲液,pH值分别为4.0和7.0。先将传感器浸泡在pH7.0的缓冲液中,调整传感器的读数至7.0,然后再将传感器浸泡在pH4.0的缓冲液中,根据传感器的反应再次调整参数,确保pH值测量的准确性。
在确定的转速和通气量下对溶氧电极进行斜率标定,设定溶氧电极为100%。
二、灭菌处理
1、罐体灭菌:
关闭所有阀门,尤其是罐底阀,防止误操作。
旋紧接种口盖、补料口及罐盖螺丝,确保密封性。
小型发酵罐(5L)可将罐体放入大灭菌锅灭菌(115℃,30分钟);大型发酵罐(10L及以上)采用蒸汽灭菌(121℃,30分钟)。
灭菌过程中,确保罐内各个部位都能充分接触到蒸汽,避免出现消毒死角。
消毒完成后,让发酵罐自然冷却或者通过适当的冷却装置冷却至合适的发酵温度。
2、空气过滤系统灭菌:
打开蒸汽过滤器底部排污阀前面的供蒸汽阀,当冷凝水排净后微开排污阀。
打开除菌过滤器底部排污阀,排净管道中的冷凝水后,微开此排污阀。
打开除菌过滤器通往发酵罐内的阀门及旁边的排汽阀,罐顶的排汽阀也要适度打开。
调整除菌过滤器上压力表的压力,使其保持为0.11MPa,计时30分钟。
灭菌结束后,关闭各路蒸汽阀门,打开冷却水阀门及排水阀门,同时打开空气流量计和空气放空阀门,把空气过滤器吹干。此时必须注意罐压的变化,绝对不能让罐压低于0.02MPa。及当罐压达到0.05MPa时,立即将空气管路打开,保证发酵罐的罐压在0.05MPa左右。
三、接种与发酵
1、接种操作:
在接种口周围使用火焰灭菌或者紫外线灭菌等方式保持接种环境的无菌状态。
将适量的微生物种子液通过接种口缓慢加入发酵罐,接种量根据不同的发酵工艺和微生物种类而定,一般在5%~10%左右。
接种过程要严格遵循无菌操作原则,防止杂菌污染。
2、发酵控制:
通过安装在发酵罐上的温度控制装置(如夹套冷却系统或者加热系统)将发酵温度控制在适宜的范围内。
根据微生物的生长特性和发酵要求,使用酸或碱溶液进行pH值调节。当pH值升高时,可以加入适量的酸性溶液(如稀盐酸);当pH值降低时,可以加入碱性溶液(如氢氧h钠溶液)。
通过溶氧电极实时监测溶解氧浓度,通过调节通气量和搅拌速度来维持溶解氧在合适的水平。
发酵罐维持正压既可以杜绝由于罐压为零时造成的染菌,还可增加氧在培养液中的溶解度,有利于菌的生长及合成。在发酵培养期间,罐内压力基本可以保持恒定。然而,在灭菌降温的过程中,为避免负压吸入环境的非洁净空气以及负压可能将罐体吸瘪情况的发生,需要通入一定的空气保压。
3、参数监控与调整:
发酵过程中需定期监测温度、pH值、溶氧量等关键参数,以便及时调整发酵条件。
根据参数变化动态调控:温度偏离设定值时,通过加热或制冷模块调整;pH下降时补加无菌氨水或NaOH溶液,pH上升时补加无菌盐酸或有机酸;溶氧过低时,可提高搅拌转速、增大通气量或通入纯氧;出现大量泡沫时,手动加入无菌消泡剂或启动自动消泡系统。
四、出料与清洗
1、出料操作:
发酵结束后,首先关闭通气系统和搅拌装置。
然后打开出料阀,将发酵液通过出料口放出。出料过程要尽量平稳,避免发酵液溅出。
2、清洗与消毒:
发酵液出料后,立即对发酵罐进行清洗。先用清水冲洗掉罐内残留的发酵液和杂质,然后可以使用适当的清洗剂进行清洗,以去除附着在罐壁和内部部件上的污垢和微生物。
清洗后,再用清水冲洗干净,确保清洗剂无残留。
最后进行消毒处理,以杀灭残留的微生物,保证下次发酵的无菌状态。
3、设备维护:
检查搅拌装置、阀门、传感器等部件的磨损情况,如有损坏或者磨损严重的部件,及时进行更换。
对发酵罐的外观进行清洁和保养,防止罐体生锈。
将发酵罐放置在干燥、通风良好的环境中,避免受潮和受到其他腐蚀性物质的侵害。
